一、强检要求
根据《药典》(2020版)三部中生物制品生产检定用动物细胞基质制备及质量控制的要求,用于生产抗体类药物、重组蛋白类药物、人用疫苗、细胞基因治疗产品、生物工程类小分子药物等生物制品的细胞系/株均须通过全面检定,并经国家药品监督管理部门批准。
二、服务优势
华微检测实验室配备有多间加强型生物安全二级实验室(P2),已在广州市备案,实验室按照GMP质量体系运行,且通过CMA、CNAS评审,B+A环境,满足无菌及相关病毒检测的环境要求。
三、 检测项目及方法
遵循FDA、CHP、EP、ICH等多个国内外法规和指导原则进行设计,建立了全面的细胞库检定操作规程,主要包括以下几个方面:细胞鉴别、无菌检查、支原体检查、内外源病毒因子检查、成瘤性/致瘤性检查、染色体检查等,检测项目及方法见下表:
检测项目 | 检测方法 | MCB | WCB | UPB | EOPC | |
细胞鉴别 | 细胞形态、同工酶法、STR法 | + | + | - | (+) | |
细菌、真菌检查 | 薄膜过滤法、直接培养法 | + | + | + | + | |
支原体检查 | 培养法、指示细胞培养法 | + | + | + | + | |
分枝杆菌检查 | 培养法 | (+) | (+) | (+) | (+) | |
内外源病毒因子检查 | 细胞形态观察及血吸附实验 | 细胞培养直接观察、血吸附试验 | + | + | - | + |
体外不同指示细胞接种培养 | 细胞病变检查、血吸附试验、红细胞凝集试验 | + | + | + | + | |
动物和鸡胚体内接种 | 动物实验法、鸡胚检查法 | + | - | (+) | + | |
逆转录病毒检查 | TM-PERT检测酶活、透射电镜法、特异性PCR法、敏感细胞感染性试验 | + | - | + | + | |
种属特异性病毒检查 | 鼠源病毒、人源病毒、猴源病毒 | (+) | - | - | - | |
牛源性病毒检查 | 细胞病变检查、红血球吸附试验、 荧光抗体检测 | (+) | (+) | - | (+) | |
猪源性病毒检查 | 细胞病变检查、红血球吸附试验、qPCR检测 | (+) | (+) | - | (+) | |
其他特定病毒检查 | 鼠细小病毒检测、腺病毒检测 | (+) | (+) | (+) | (+) | |
染色体检查 | 显微观察法、流式细胞仪法 | (+) | (+) | - | (+) | |
成瘤性检查 | 裸鼠体内接种实验、软琼脂克隆形成实验 | (+) | (+) | - | - | |
致癌性检查 | 裸鼠、新生仓鼠、新生大鼠体内接种实验 | (+) | (+) | - | - |
按照《药典》(2020版)三部通则1101无菌检查法在B+A环境中进行,可提供薄膜过滤法和直接接种法,如下图:
注:从左到右分别是铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉、阴性对照。
五、支原体检查
按照《药典》(2020版)三部通则3301支原体检查法的要求进行,可提供符合法规要求的支原体检查,包括培养法和指示细胞培养法,培养法检测的灵敏度高于中国药典要求, 肺炎支原体达到10-9,口腔支原体达到10-5,如下图:
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注:从左到右分别10-7、10-8、10-9(各3管),阴性对照。 | 注:从左到右分别10-3、10-4、10-5(各3管),阴性对照。 |
按照《药典》(2020版)三部通则3302外源病毒因子检查法的要求进行,可提供小鼠脑内和腹腔接种、乳鼠脑内和腹腔接种和鸡胚尿囊腔和卵黄囊接种,如下图:
尿囊腔接种:
注:从左到右分别是供试品试验组、阴性对照组、阳性对照组。
卵黄囊接种:
注:从左到右分别是供试品试验组、阴性对照组、阳性对照组。
七、体外不同指示细胞接种培养
按照《药典》(2020版)三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及质量控制和通则3302外源病毒因子检查法的要求进行,将供试品接种至3种指示细胞(Vero 、MRC-5、同种属同组织类型来源细胞),连续培养14天或28天,期间观察细胞病变,并采用血吸附试验和红细胞凝集试验检测是否存在病毒污染,如下图:
不同指示细胞接种观察:
注:从左到右分别是供试品接种至VERO细胞培养1-3-5-8-11-14天的细胞形态。
注:从左到右分别是供试品接种至MRC-5细胞培养1-3-5-8-11-14天的细胞形态。
血吸附试验:
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注:从左到右分别是供试品试验组、血吸附阴性对照组、血吸附阳性对照组。 |
按照《药典》(2020版)三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及质量控制及通则3604新生牛血清检测要求的要求进行。通过接种指示细胞培养21天,分别进行CPE观察、HAd检查及IF检测。
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