Western Blotting实验技术服务

Western Blotting实验技术服务是一种基于抗体与特定蛋白结合的分子生物学技术，用于检测和分析蛋白质表达。下面将深入探讨Western Blotting实验技术服务：

Western Blotting实验技术服务是生命科学研究中不可或缺的工具之一，其通过特定的抗体来检测和分析目标蛋白的表达情况，具有高灵敏度和特异性。在进行Western Blotting实验时，需特别注意样品的制备、抗体的选择及实验对照的设置

Western Blotting基本原理

SDS-PAGE电泳：首先通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离样品中的蛋白质，SDS会与蛋白质结合并使其带负电，导致其在电场中向正极移动，从而根据分子量大小分离不同蛋白质。

电转移：分离后的蛋白质被转移到固相载体（通常是硝酸纤维素膜或PVDF膜）上，这个过程称为"印迹"。

免疫检测：使用特异性一抗与目标蛋白结合，然后加入酶标记或荧光标记的二抗，通过化学发光或荧光方法使目标蛋白在X光胶片或数字成像系统中可见。

Western Blotting实验步骤

样品准备：收集并处理细胞或组织样品，提取总蛋白并进行定量。

电泳与转印：通过SDS-PAGE电泳分离蛋白，然后将蛋白转移到固相载体上。

杂交与显色：使用特异性一抗和二抗进行免疫反应，并通过ECL、荧光或其他底物进行显色。

数据分析：根据条带的位置和强度定性或定量分析蛋白表达水平。

Western Blotting应用范围

蛋白表达分析：用于检测特定基因调节、基因功能研究以及验证其他蛋白分析技术如蛋白芯片、蛋白质谱的结果。

疾病诊断与研究：应用于疾病标志物的检测和发病机制的研究，尤其在自身免疫病和肿瘤研究中具有重要意义。

Western Blotting技术服务特点

高灵敏度和特异性：利用抗体高度特异性结合特性，能够敏感地检测低丰度蛋白。

广泛的适用范围：适用于多种生物样品（如动物组织、植物、微生物等）和多种研究目的。

多样化的显色方法：包括放射自显影、化学发光、荧光等多种显色方法，满足不同的实验需求和条件。

Western Blotting技术服务注意事项

样品质量：确保样品新鲜且正确保存，避免蛋白降解或修饰（如磷酸化蛋白去磷酸化）。

抗体选择：提供质量保证的一抗，并根据预实验确定一抗稀释度和二抗选择。

实验对照：设置内参蛋白以校正上样误差，并尽量提供阳性对照样品以验证实验体系。