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细胞周期检测

细胞周期是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程。细胞周期由多个阶段组成，通常包括G1期（DNA合成前期，细胞体积显著增大）、S期（DNA合成期，包括蛋白合成 ）、G2期（DNA合成后期，大量合成RNA和蛋白质）、M期（有丝分裂和细胞分裂）以及GO期（细胞静息休眠或执行生物学功能）。在细胞周期的不同时期，细胞核内的DNA含量存在差异。使用染料对DNA进行染色（如PI染料），可根据其荧光强度判断细胞所处时期。

细胞凋亡检测

细胞凋亡是指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。AnnexinV是一种钙依赖性的磷脂结合蛋白，能够与（磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine，简称PS）结合，磷脂酰丝氨酸主要分布在细胞膜内侧，在细胞发生凋亡的早期，不同类型的细胞都会把磷脂酰丝氨酸外翻到细胞表面，即细胞膜外侧，因此荧光标记的Annexin V可用于检测暴露于早期凋亡细胞外部的PS。Annexin V还可以染坏死细胞，因为这些细胞的膜破裂，使Annexin V可以进入整个质膜，但是Annexin V就无法区分坏细胞死（中晚期凋亡细胞）和早期凋亡细胞。因此，通过与碘化丙啶（PI）共染色，可以将凋亡细胞与坏死细胞（中晚期凋亡细胞）区分开，因为早期凋亡细胞和活细胞的细胞膜仍然完整，PI能进入坏死细胞（中晚期凋亡细胞），但是被早期凋亡细胞排除在外。

左上象限Q1：此区域为坏死细胞。包含细胞碎片和机械损伤的细胞

右上象限Q2：此区域为晚期凋亡细胞

右下象限Q3：此区域为早期凋亡细胞

左下象限Q4：此区域为活细胞

细胞克隆形成试验

细胞克隆形成实验是用来检测细胞增殖能力、侵袭性、对杀伤因素敏感性等项目的重要技术方法。单个细胞在体外连续6代以上，其后代所组成的细胞群称为克隆或集落，通过计数克隆形成率，可对单个细胞的增殖潜力做定量分析，克隆形成率是反映细胞群体依赖性和增值能力的两个重要性状。

克隆根据培养介质不同分为平板克隆和软琼脂克隆，其中平板克隆形成实验主要适用于贴壁生长的细胞，软琼脂克隆形成实验常用于悬浮生长的细胞。

Control group                  Target group

细胞迁移试验

细胞划痕法是简捷测定细胞迁移运动和修复能力的方法，类似体外伤口愈合模型，在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上，用微量枪头或其它硬物在细胞生长的*区域划线，去除*部分细胞，然后继续培养细胞至试验设定时间，观察周边细胞是否迁移至*划痕区，以此判断细胞的生长迁移能力。试验通常需设定对照组和供试品组，通过不同分组之间的细胞对于划痕区修复能力的不同来计算迁移率可以判断供试品迁移与修复能力。

对照组（牛I型胶原蛋白）：0h-24h-48h-72

实验组（人重组胶原蛋白）：0h-24h-48h-72h

细胞毒性试验

在电子耦合试剂存在时，WST-8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐），可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物（formazan），其颜色的深浅与细胞增殖成正比，与细胞毒性成反比，对同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。使用酶标仪在450nm波长处测定OD值，可以间接反映活细胞的数量。用该方法可以准确快速判断出供试品对目标细胞的半数致死量。

正常细胞                                           病变细胞(CPE)                            毒性细胞

由回归方程 y=-10.02ln(x)+95.21 可得，当供试品能对一半细胞产生毒性，即 y=50%时，此时 x=91.05μg/mL。