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灭活病毒保存液怎样灭活和裂解病毒
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  • 2021-11-29

灭活病毒保存液怎样灭活和裂解病毒

灭活保存液是病毒保存液的一种,主要用于灭活病毒以防二次感染,这种病毒保存液的特点是能够快速地灭活病毒,将病毒蛋白膜衣壳降解掉,同时将病毒核酸释放出来,新冠病毒就是释放和降解RNA病毒,这样可以进行逆转录后PCR扩增实验,达到利用核酸检测病毒的目的。

灭活型病毒保存液中除了含有裂解的成分,通常还含有使蛋白变性破坏膜结构的去污剂、生物缓冲剂还有防止核酸酶降解核酸的抑制剂,以及维持核酸结构稳定的试剂等。裂解体系还可能加入蛋白酶,将蛋白切成小片段,促进蛋白质与核酸的分离。

裂解病毒的方法有很多种,一般比较常见的两种是加热法和浓盐法:

浓盐法是用高浓度的盐可以破坏核酸与蛋白质之间的次级键,使 ** 白解联从而把病毒核酸释放出来。通常使用盐酸胍、异硫氰酸胍或非胍盐裂解盐,可以直接裂解灭活病毒,不需要加热处理样本,简便快捷

加热法是通过加热到80℃~100℃的温度值基础上,因为一般样本都是-70℃冷冻的,一般需要加热5~10分钟,这种操作比较简单,只用一步就可以得到用于核酸PCR扩增的模板,不需要任何离心、抽提等操作步骤,比常用的CheleX100提取方法和苯酚/氯仿等方法要快。这种方法虽然简单快捷,但是提取的核酸含量会比较少。

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