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沉淀试验的影响因素
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  • 2022-08-09
沉淀的成功依赖于抗原的纯度以及制备抗体的难易,主要受两方面因素的影响:1、抗原原液的丰度,2、抗体对抗原的亲和力。
有3种类型的抗体可用于沉淀:多克隆抗体,混合单克隆抗体和单克隆抗体。
多克隆抗体
混合单克隆抗体
单克隆抗体
反应强度极好
抗体依赖性(极差到极好)极好
特异性一般良好(有时本底高)
极好,但有些出现交叉反应
极好,避免使用有交叉反应的抗体
优点稳定,多价反应特异
供应不受限制稳定,多价反应特异
供应不受限制
缺点本底不易清除
需对抗原有高亲和力
供应不普遍
多抗的本底较高,可通过滴定产生沉淀所需的抗血清量,来有效地清除某些非特异性本底。其方法是将特异性抗体降低到能定量结合抗原的较低滴度,使本底保持较低。
沉淀要求抗原的纯度尽可能提高。降低本底,用不与待检抗原结合的非特异性抗体预处理,可以从抗原溶液中除去非特异性结合蛋白,即此法*次是用非抗体降低本底,第二次再用所研究的抗体,这样进行二次沉淀是达到纯化沉淀物较有效的方法。
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