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支原体微生物的污染检测,支原体污染的检测方法
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  • 2021-04-06
一般根据支原体种类不同,采取不同的方法进行检测。目前常用的检测方法有:
1. 试剂盒检测法:
目前已有专门做支原体检测的试剂盒,可以用细胞滴片进行检测。
2. 观察细胞的形态和生长特征:
支原体污染比较严重时可出现生长减慢,有的培养基pH明显变酸,并出现细胞病变,以此可依次对支原体污染进行检测,但有些情况下支原体污染引起的病变特征与病毒感染相似,因此不能准确诊断。
3. 分离培养法:
大多数支原体可出现特有的典型菌落。因而可依次尽心检测,该方法准确、可靠,但时间长,敏感性不够高。
4. DNA结合荧光素染色法:
利用荧光染剂(bisbenzimide,Hoechst 33258)侦测支原体污染。荧光染料会结合到DNA之Adenosine-Thymidine (A-T) rich区域,因为支原体DNA中A-T含量占多数(55~80%),所以可将其染色而侦测。被支原体污染之细胞经染色后,在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一之荧光小点,即为支原体之DNA,证明有支原体之污染。
5. 电子显微镜和免疫电子显微镜法:电子显微镜或者免疫电镜下对样本进行观察,此法较准确,但受条件限制,时间长,敏感性不高。
6. 间接免疫荧光法和免疫印迹:简便、快速、特异性强。
7. 使用支原体通用引物,PCR扩增检测支原体。
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